组培育苗步骤(植物组织培养的步骤有哪些？)

一、植物组织培养的步骤有哪些？

植物组织培养可以分为四个阶段：

（1）建立无菌体系，即外植体及培养基的消毒、接种，获得愈伤组织或器官。

（2）进行增殖，不断分化产生新的植株，或直接产生不定芽及胚状体，也可以根据需要反复进行继代培养，以达到大量繁殖的目的。

（3）将植株转移进行生根培养，可以转入生根培养基，也可以直接切取进行扦插生根。

（4）试管苗过渡，即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。

二、速生桉组培苗培育方法？

一、林地选择

　　选择造林地是种植速生丰产林的基础。必须选择土层深厚肥沃的低丘陵地，土壤质地以砂质壤好，要求土壤疏松、透水、透气能力强，最好适宜机械耕作的林地。

　　二、树种选择

　　桉树的优良品种很多，各有各的优缺点，造林时应根据不同的立地条件选择不同的桉树品种，不同的树种(品系)对立条件要求不同，尤其是对土壤肥力要求不同。因此，种植桉树丰产林要按照“适地适树”的原则，根据造林地情况选择适当的造林树种或品种，才能取得较好的效益。

　　三、育苗

　　主要采取营养袋方式育苗。3月中旬将种子用冷水浸泡2~3天，营养土装袋后把浸泡好的种子播入袋中(每袋4粒)，然后给营养袋覆盖1层细粪，洒充足的水，盖上膜，保证通风良好，每天洒水1次保证水分供应。在小苗成长期间定苗，拔出劣苗，每个营养袋保留1株壮苗。待苗高15厘米左右时移栽，时间在5月下旬雨季开始时。

　　四、整地

　　①穴状整地。适于地形较破碎、25度以上的陡坡地，坑平面呈方形，长0.5米、宽0.4米、深0.3米，穴面与原坡面持平或稍向内倾斜。各穴沿等高线布设，上下两行穴口呈“品”字形错开排列。树苗栽植在穴内，距下沿位置0.2~0.3米，穴两端开挖宽、深各0.2~0.3米的倒“八”字形截水沟。

　　②水平沟整地。适于坡度较小的山地，沟口上宽0.6~1米，沟底宽0.3~0.5米，沟深0.4~0.6米。沟由半挖半填做成，内侧开挖生土用作外侧作埂。树苗植地沟底外侧，根据设计的造林行距和坡面暴雨径流情况，确定上下两沟间距和沟的具体尺寸。

　　五、植苗

　　按照2米×2.5米的株行距，每亩栽植115株。栽植时先把苗木袋除掉，并维护好根团的完整，然后放入坑内，不要使根弯曲，应均匀舒展，然后扶正苗木，再填土压实固定。

　　六、抚育管理

　　①施肥。桉树苗成活后，金银花扦插育苗有讲究每亩用三元复合肥40千克或磷肥40千克、尿素20千克混合施于坑周围。第二年、第三年6~7月分别追施1次三元复合肥，每次追肥量150克/株。同时，为预防黄蚂蚁为害，在树苗成活后，每亩用10%二嗪磷颗粒剂600克与土壤搅拌均匀后施于坑周围。

　　②松土。第一次抚育在原穴范围内，松土深度10厘米左右，扩穴部分松土深度20厘米，第二次、第三次松土深度在30厘米左右。

三、组培技术？

第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。

第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。

第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1～2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3～10次左右。

四、组织培养技术流程？

零阶段 母本的选择和处理  

在组培实验开始前，必须慎重选择母本材料。母本的品种/物种特性要典型，没有任何病害迹象。需要考虑对母本材料进行一定处理，以降低stage 1 的外植体污染率。适当的环境条件或化学试剂处理有可能提升后续组培阶段的生长、形态发生和增殖率，例如一定的高温处理、细胞分裂素和/或赤霉素的喷施。对母本可能携带的细菌和病毒进行检测是商业化植物组织培养的必要环节，但常常被忽略了。

第一阶段 无菌培养体系的建立

本阶段主要是建立起外植体的无菌培养体系。成功的标志是外植体没有微生物污染，并且有一定的生长，例如茎尖的生长或愈伤组织的形成。本阶段通常会有大量的外植体接种，经过短期培养应该将有污染出现的培养容器丢弃掉，不再继续培养。本阶段只要获得目标数量的无污染，其表现生长的外植体即可，不需要100%的成功率。

第二阶段 繁殖体的增殖

本阶段主要目标是扩增繁殖体的数量。例如，侧芽的生长，不定芽的产生，体细胞胚的形成和微型储藏器官（块茎和鳞茎）的形成。本阶段产生的繁殖体通常再次进入增殖循环中，以扩增到需要的数量。

第三阶段 移栽前培养

Stage Ⅱ产生的小苗或者芽（shoots）通常不具备在基质中自主生长的能力。在stage Ⅲ，需要通过一些培养措施使得这些小苗产生足够的光合能力。有些植物需要在stageⅢ进行特殊处理以避免生长停滞或休眠。

生根培养是stage Ⅲ的重要工作。通常需要将芽转入生根培养基中进行生根。有的情况下，在生根培养前，需要将芽培养到足够的长度。为了降低成本，有很多实验室会将未生根的芽转出组培瓶外进行生根培养。

第四阶段 移栽驯化

本阶段为组培苗从组培瓶转入温室驯化培养。本阶段至关重要，如果操作不当，会造成大量损失。主要的原因有两个：

1. 组培苗容易失水死亡。组培苗通常在高湿度和低光强条件下培养，叶片表面的蜡质未形成。组培苗的气孔在遇到湿度降低时可能不会闭合。以上原因会导致组培苗在移栽后迅速失水死亡。

2. 组培苗以蔗糖为碳源且处于低光强下，光合能力较弱。如果在移栽后短时间内不能形成光合能力，也会出现死亡。

通常组培苗从组培容器中取出后需要洗净根上的琼脂，转入移栽基质中。在驯化早期，需要高湿度和低光强的条件，随后逐渐减低湿度和增加光强，直到适应温室环境。

五、组培苗养殖方法？

方法/步骤分步阅读

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组培幼苗的幼嫩，组培幼苗在培养室的试管内培养，培养基是软性的，使得兰花幼苗和兰根很娇嫩，一不小心就能损伤兰花，所以在洗培养基、移栽时需要十分小心。第三是组培幼苗的抗病能力弱，组培兰花在无菌状态下生长，试管内一旦感染细菌，感染的兰花就会销毁，因此刚出试管的组培苗自身的抗病菌能力很弱，很容易受外界的细菌感染而死亡，随着硬化时间的延长，组培苗会慢慢适应有菌的环境，兰花自身产生抗体，所以硬化时间不长的组培苗开始阶段的杀菌工作很重要，但兰花又是根菌共生的植物，靠兰根上的有益菌分解植料中的养分生长，因此又不能过分杀菌。第四是组培苗对移栽后的环境温度比较敏感，兰花组培在培养室时的温度很适宜兰花的生长，如娇生惯养着的孩子，但一般的兰友移栽后的环境很难做到与培养室相近的环境，极端的低温与高温也容易使组培兰花死亡。

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其实组培兰花幼苗并不难养，是相对自然培养的兰花而言难养些，只要在了解组培苗幼苗的特性后有针对性的养殖，就会显得与其他兰花差不多，等到硬化期较长后，正常管理下与一般的苗并无二样，尤其在组培苗硬化后逐步适应了自家的植料后，除了在光照和极端温度下注意外就不用专门照顾。

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盆具要选择透气性好的小盆，通常是使用６－８厘米口径的中等高度盆，盆具小可弥补组培兰花幼苗根部呼吸较弱的缺点，使盆内的水分与盆面基本相一致，如没有透气的盆具也可用小的塑料盆，但在管理上适当减少浇水和加强通风

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上盆时可多株合栽，也可单独栽种，多株合栽对兰花的生长有好处，但遇到其中一株发病时会感染旁边的兰株，所以单株相对保险点，兰友可根据自己的条件和喜好选择

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植料使用到一定的时候也要翻盆，一般使用植金石的养殖时间是一年，植金石在养殖过程的施肥、杀菌时会积累无机盐和有害物质，更换植料时可采取清心、天使二位网主换化妆土的方法，也可如一般兰花的一样全换植料，前者的做法很少伤根与苗；四是及时清理腐败的龙根及根、枯叶，组培兰花幼苗的龙根和根有时会腐烂，龙根和根的腐烂会引发大量的有害菌，龙根和根直接连着兰花的芦头，会通过输送水和肥料的通道把带菌的腐烂质输入到兰花的芦头，使兰花感染死亡，这类情况的发生比较普遍，有效的办法是定期倒些盆面的植料，及时观察龙根的情况，一旦发现龙根有变质的现象，立刻分离龙根，并用杀菌药封闭分离的创口，要防止为观察龙根而经常性倒盆，分离腐烂的龙根和清理空根时要彻底，不要为了后期的龙根腐烂过早分离，健康的龙根是供给组培苗生长的营养仓库，分离龙根实属无奈之举，管理到位，龙根会存在一年以上甚至更长时间

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在兰花养殖时植料中经常会有蓟马等小虫，发生软腐的兰株内也发现有线虫，这些害虫会使兰根出现伤口和传播有害菌，使组培苗发病死亡，因此定期杀虫也很有必要，一般是兰花生长期每月一次，要选择低毒且有针对性的杀虫剂，严格按推荐的安全比率稀释，否则要么杀不死害虫，要么发生药害危害兰花，最好是使用如除虫菊等的无害杀虫剂

六、植物组织培养一般经过哪些主要工序，急需？

根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术——植物的组织培养技术　　植物组织培养的简单过程如下：剪接植物器官或组织——经过脱分化（也叫去分化）形成愈伤组织——再经过再分化形成组织或器官——经过培养发育成一颗完整的植株。　　植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。　　植物组织培养即植物无菌培养技术，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科植物组织的培养方法：　　1、非试管微组织快繁　　非试管微组织快繁技术是将外植体（一般要求带一叶一芽）放置在室内外普通沙子培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。一般植物7～15天可以生长出根系。此技术投资低，操作环节少。　　2、试管组织培养　　试管组织培养是将外植体（即离体组织、器官或细胞）放置在试管等器皿中在无菌的条件下进行组织培养获得试管苗。　　植物组织培养的优点：　　1、占用空间小，不受地区、季节限制。　　2、不携带病毒　　3、培养周期短　　4、可用组培中的愈伤组织支取特殊的生化制品　　5、可短时间大量繁殖，用于拯救濒危植物　　6、可诱导之分化成需要的器官，如根和芽　　7、解决有些植物产种子少或无的难题，　　8、不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征　　9、投资少，经济效益高　　10、繁殖方式多，试用品种多　　植物组织培养一般分为以下几种：　　　　1、胚胎培养　　指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。　　2、器官培养　　指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖、茎节和切段，叶的叶原基、叶片、叶柄、叶鞘和子叶，花器的花瓣、雄蕊（花药、花丝）、胚珠、子房、果实等的离体无菌培养。　　3、组织培养　　指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。这是狭义的植物组织培养。　　4、细胞培养　　指以单个游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。　　5、原生质体培养。　　指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。 　　培养材料的采集　　要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒 　　从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。　　试剂 　　? 乙醇。 　　? 吲哚乙酸（ IAA） 或 2 ，4 – D （生长素类似物）。 　　? 氯化汞（升汞）或次氯酸钠。 　　? 6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） 　　? MS 培养基　　? 0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 　　配制培养基 　　（ 1 ）愈伤组织诱导培养基： MS 培养基（蔗糖含量为 10 g/L ， 2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂 10 g/L ）。 　　（ 2 ）试验培养基：在 MS 培养基中加入 IAA 和 6–BA 。 　　吲哚乙酸（IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。　　仪器设备 　　培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（ 100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸。 　　培养基灭菌 　　将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至 pH 5.8 ，趁热分装于 100 mL 三角烧瓶中，每瓶约 20 mL 。待培养基冷却凝固后，用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶（管）口，并用棉线扎牢，然后在高压灭菌锅中 121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。 　　植物组织培养步骤　　第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当然，最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。　　第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。　　第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1—2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意：①酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料，特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80（一种湿润剂），可以降低植物材料表面的张力，达到更好的消毒效果。　　植物组织培养的特点　　1、培养条件可以人为控制　　组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。 　　2、生长周期短，繁殖率高　　植物组织培养是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然植物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。 　　3、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制　　植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。希望对你有所帮助！